奧沙拉秦鈉膠囊為水楊酸類藥物 , 通過偶氮鍵連接兩分子 5- 氨基水楊酸 , 到達結腸部位后其偶氮橋在細菌作用下斷裂 , 分解為二分子 5- 氨基水楊酸并作用于結腸炎癥黏膜 ,抑制前列腺素合成 , 抑制炎癥介質白三烯的形成 , 降低腸壁細胞膜的通透性 , 減輕腸黏膜水腫 , 用于輕中度急慢性潰瘍性結腸炎的治療[1].EP7.0 美沙拉秦原料質量標準中對苯胺雜質檢查控制 , 苯胺雜質對人體健康能產生高鐵血紅蛋白血癥、溶血性貧血和肝、腎損害 , 由于奧沙拉秦鈉含有二分子美沙拉秦[2], 因此對苯胺雜質進行考察、控制。本文參考EP7.0 美沙拉秦原料質量標準項下雜質 K 檢查方法[3], 建立了 HPLC 法測定奧沙拉秦鈉膠囊中苯胺雜質的含量 , 方法專屬性、靈敏度、耐用性等符合要求 , 可以滿足奧沙拉秦鈉膠囊中苯胺雜質檢查。
1材料
1. 1儀器 Agilent 1260 高效液相色譜儀 （ 包括 VWD 檢測 器、G1311C 自 動 調 配 泵、G1329B 標 準 自 動 進 樣 器、G1316A 可調柱溫恒溫箱、Agilent 色譜化學工作站等 ） ;電子分析天平。
1. 2藥 品 與 試 劑 苯 胺 對 照 品 （99%, Aladdin IndustrialCorporation） ;奧 沙 拉 秦 鈉 膠 囊 （ 批 號 :110203、110206、110209） ;甲醇 （ 色譜級 , 美國 Tedia 有限公司 ） ;其他試劑均為分析純。
2方法與結果
2. 1色譜條件的選擇和系統適用性試驗 色譜柱 :AgilentC18（4.6×250 mm, 5 μm） ;流動相 :甲醇 :混合溶劑 （ 含 1.41g/L 磷酸二氫鉀和 0.47 g/L 磷酸磷酸氫二鈉二水化合物的混合溶液并用 42 g/L 氫氧化鈉溶液調節 pH 值至 8.0）15∶85 ;流速 1.0 ml/min, 檢測波長為 205 nm ;柱溫為 40℃ ;取苯胺鹽酸鹽對照品 27.8 mg, 置于 100 ml 容量瓶 , 用流動相溶解并稀釋至刻度 , 再吸取 0.2 ml 置于 20 ml 容量瓶 , 用流動相稀釋至刻度 , 再吸取 0.2 ml 置于 20 ml 容量瓶 , 用流動相稀釋至刻度 , 作為對照品溶液 , 進樣量 50 μl.對照溶液主峰信噪比至少為 10.
2. 2有關物質檢查 精密稱取裝量差異項下內容物的細粉適量 （ 約 40 mg）， 置于 20 ml 容量瓶中 , 加流動相溶解并稀釋至刻度 , 搖勻 , 濾過 , 取續濾液作為供試品溶液。取苯胺鹽酸鹽對照品 27.8 mg, 置于 100 ml 容量瓶 , 用流動相溶解并稀釋至刻度 , 再吸取 0.2 ml 置于 20 ml 容量瓶 , 用流動相稀釋至刻度， 再吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶， 用流動相稀釋至刻度，搖勻過濾即得。精密量取上述兩種溶液各 50 μl, 分別注入液相色譜儀。供試品中苯胺雜質峰不得大于對照品溶液中苯胺峰面積 （10ppm）。
2. 3方法的專屬性 取苯胺鹽酸鹽對照品 27.8 mg, 置于100 ml 容量瓶 , 用流動相溶解并稀釋至刻度 , 吸取 0.2 ml 置于 20 ml 容量瓶 , 用流動相稀釋至刻度 , 吸取 0.2 ml 置于20 ml 容量瓶 , 用流動相稀釋至刻度 , 作為苯胺定位用溶液。精密量取 50 μl, 注入液相色譜儀。
取奧沙拉秦鈉膠囊裝量差異項下內容物的細粉適量 （ 約40 mg）， 精密稱定 , 置 20 ml 容量瓶中 , 加流動相溶解并稀釋至刻度 , 過濾 , 取續濾液作為供試品溶液。精密量取 50 μl,注入液相色譜儀。
在苯胺對照品溶液和奧沙拉秦鈉樣品色譜圖中 , 苯胺峰保留時間位置處無干擾峰。
2. 4檢測限 對照品溶液 :取本胺鹽酸鹽對照品 27.8 mg,至 100 ml 容量瓶 , 用流動相溶解并稀釋至刻度 , 再吸取 0.2 ml至20 ml容量瓶， 用流動相稀釋至刻度 , 再吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶 , 用流動相稀釋至刻度。精密量取對照品溶液 10 μl進樣。性噪比 3 時 , 檢測限[4]為 2.78×10-4μg.
2. 5強制破壞試驗
2. 5. 1酸破壞 取奧沙拉秦鈉樣品約 40 mg, 置于 20 ml 容量瓶中 , 滴加 7 mol/L 的鹽酸 5 滴 , 再加 10 ml 流動相溶解 ,室溫下放置2 h后， 用2 mol/L的氫氧化鈉溶液調節pH至中性，后加流動相稀釋至刻度。
2. 5. 2堿破壞 取奧沙拉秦鈉樣品約 40 mg, 置于 20 ml 容量瓶中 , 滴加 2 mol/L 的氫氧化鈉溶液 10 滴 , 再加 10 ml 流動相溶解 , 室溫下放置 2 h 后 , 用 2 mol/L 的鹽酸調節 pH 至中性 , 后加流動相稀釋至刻度。
2. 5. 3高溫破壞 取奧沙拉秦鈉樣品約 40 mg, 置于 20 ml容量瓶中 , 加流動相溶解并稀釋至刻度 , 后放置水浴中 3 h.
2. 5. 4光照破壞 取奧沙拉秦鈉樣品約 40 mg, 置于 20 ml容量瓶中 , 加流動相溶解并稀釋至刻度 , 在光照 （4500±500）Lx條件放置 2 d.
2. 5. 5氧化破壞 取奧沙拉秦鈉樣品約 40 mg, 置于 20 ml容量瓶中 , 加入 30% 雙氧水 1 ml, 再加 10 ml 流動相溶解 , 室溫下放置 2 h 后 , 后加流動相稀釋至刻度。
分別取上述溶液各 50 μl 注入液相色譜儀 , 均未檢出苯胺雜質 , 說明奧沙拉秦鈉較為穩定 , 在較為劇烈條件下未降解產生苯胺雜質。
2. 6溶液穩定性 取上述樣品溶液 , 分別于 0、2、4、6、8 h 進樣 50 μl 注入液相色譜儀 , 記錄色譜圖 , 結果見表 1.
2. 7耐用性 將色譜條件中的參數作適度變化 , 采用不同色譜柱、不同柱溫、不同流速 , 考察對測定結果的影響情況 ,性噪比均能達到 10, 方法耐用性良好。
2. 8有關物質檢查結果 對某制藥企業 111203、111206、111209 三批按“2.2 有關物質檢查”方法檢查 , 均未檢出苯胺雜質。
3小結
奧沙拉秦鈉樣品在酸、堿、高溫、光照、氧化條件下破壞 ,均未檢出苯胺雜質。EP7.0 奧沙拉秦鈉原料質量標準項下未將苯胺訂入標準。但苯胺作為特定雜質 , 奧沙拉秦鈉含有美沙拉秦結構 , 本法可作為奧沙拉秦鈉可能含有苯胺雜質檢查的檢查方法。
為使奧沙拉秦鈉在色譜系統中盡快洗脫 , 可以在苯胺峰保留時間之后 , 設定較高比例甲醇 , 對奧沙拉秦鈉等相關成分洗脫。
參 考 文 獻
[1] 范竹萍 , 曾民德 . 國產奧沙拉秦鈉膠囊治療潰瘍性結腸炎 149例 . 中國臨床藥理學與治療學 , 1999, 4（1）：12-16.
[2] 陳龍珠 , 陳玨 . 奧沙拉秦鈉膠囊溶出度測定 . 西北藥學雜志 ,2000, 15（3）：168.
[3] 曾國明 . 柳氮磺胺吡啶片與奧沙拉秦鈉膠囊對潰瘍性結腸炎的治療效果比較 . 醫學信息旬刊 , 2011, 24（7）：196-197.
[4] 石晶波 . 奧沙拉秦鈉膠囊和柳氮磺胺吡啶片在治療潰瘍性結腸炎中的療效比較 . 吉林醫學 , 2012, 33（18）：168.
