舒肝和胃丸\\(大蜜丸\\) 是由醋香附，白芍，佛手，陳皮，柴胡等十三味中藥組成的復方制劑，具有疏肝解郁，和胃止痛功效，用于肝胃不和，兩脅脹滿，胃脘疼痛等病癥。2010 版《中國藥典》一部對該方劑的含量測定的指標只有芍藥苷一種成分，測定指標單一。陳皮、佛手是其主要成分，而橙皮苷就是陳皮和佛手的主要活性成分之一。橙皮苷是一種天然的二氫黃酮苷，屬黃烷酮類化合物，性質穩定，在該方劑中含量較高。為彌補目前該劑型含量測試指標單一的不足，保證臨床用藥的安全性和有效性，控制藥品的質量，本試驗采用高效液相色譜法測定橙皮苷的含量。
1、 材料和儀器
本實驗的供試品舒肝和胃丸購自大參林連鎖藥店，批號 1011043、1013269、12010337; 對照品橙皮苷購于中國藥品生物制品檢定所，批號 110721 －201115，供含量測定用，含量為 95． 30%; 甲醇為色譜純，磷酸為分析純; 實驗用水均為蒸餾水。LC-2010C 高效液相色譜儀 \\(日本島津公司 \\) ;XS205 電子分析天平\\(瑞士梅特勒 － 托利多公司\\) ; AK-2000 電子天平 \\(中韓合資科成電子儀器有限公司\\) ;KQ-3004VDE6 雙頻數控超聲清洗器\\(南京溫諾儀器設備有限公司\\) 。
2、 實驗方法與結果
2． 1 系統適應性試驗
色譜柱: Syncronis C18\\(4． 6 mm ×250 mm，5 μL\\) ，流動相: 甲醇 － 0． 11% 磷酸溶液\\(39∶ 61\\) ，流速: 1． 0mL / min，測波長: 283 nm，柱溫: 35 ℃ ，泵壓不大于 25MPa; 定量方法: 外標法; 進樣量: 10 μL。在此條件下，理論板數按橙皮苷計算不少于 2 000，分離度 ＞1． 5。由圖 1 可知，供試品和對照品溶液在相同的保留時間處出現對應的峰，并且能達到基線分離; 佛手、陳皮雙陰性對照溶液在對應的保留時間處無吸收峰，表明其他幾味藥對橙皮苷的測定無干擾，說明該方法專屬性較好。
2． 2 供試品溶液的制備
取本品大蜜丸，剪碎，取約 1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入 50 mL 甲醇，密塞，稱定重量，超聲處理30 min\\(功率 250 W，頻率 33 kHz\\) ，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。
2． 3 對照品溶液的制備
精密稱定含量為95． 30%橙皮苷對照品10． 12 mg，置 100 mL 量瓶中，加甲醇適量使其溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液\\(96． 41 μg/mL\\) 。精密吸取上述儲備液 3 mL，置 50 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液\\(5． 784 μg/mL\\) 。用時適當稀釋成不同溶度的溶液。
2． 4 陰性樣品溶液的制備
按處方配比，取除陳皮、佛手外的其他十一味藥材，粉碎成細粉，過篩，混勻。每 100 g 粉末用煉蜜 120～ 130 g 制成大蜜丸，再按供試品溶液制備方法制得缺陳皮、佛手的雙陰性樣品溶液。按同法制得佛手陰性對照溶液及陳皮陰性對照溶液。
2． 5 線性關系考察
精密量取橙皮苷對照品儲備液\\(96． 41 μg/mL\\) 1、2、4、6、8 mL，置 10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，分別精密吸取 10 μL，注入液相色譜儀，按含量測定的方法測定，并以對照品的濃度\\(μg/mL\\) 為縱坐標，測得的峰面積為橫坐標，進行回歸處理。以對照品的濃度\\(μg/mL\\) 為縱坐標，測得的峰面積為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程: y =0．000 057 80 X +0． 207 4，r = 0． 999 9，RSD = 1． 461% 。結果表明橙皮苷在 9． 644 ～96． 44 μg/mL 范圍內呈良好的線性關系。
2． 6 儀器精密度試驗
取同一濃度的對照品溶液\\(5． 784 μg/mL\\) ，按擬定的色譜條件連續進樣 6 次，所得的峰面積大小接近，RSD = 0． 18% ，小于 3% ，精密度良好。
2． 7 重復性試驗
取同一批供試品\\(批號 1011043\\) 6 份，按“2． 2”項下方法制備和測定。6 份舒肝和胃丸含有橙皮苷的量均在 13． 40 ～13． 50 mg/丸之間，平均值是 13． 48 mg/丸，RSD = 0． 03% ，小于 3% 重復性良好。
2． 8 穩定性試驗
取同一份供試品\\(批號 1011043\\) 溶液，按“2． 2”項下方法，分別在 0、4、8、12、16、24 h 進樣測定。結果表明不同時間段測得舒肝和胃丸中橙皮苷的峰面積平均值是 1 066 657，RSD =0． 15%，因此舒肝和胃丸自制備后 24 h 內穩定。
2． 9 加樣回收率試驗
取同一批已知含量\\(批號: 12010337，含量 2． 893mg / g\\) 的供試品 6 份，每份取樣量為供試品取樣量\\(1 g\\)的50%，置具塞錐形瓶中，以當前取樣含量的1∶1 的比例，分別精密加入橙皮苷對照品溶液\\(5．784 μg/mL\\) 25 mL，密塞，稱定重量，按“2． 2”項下的供試品溶液制備方法制備供試液，按上述色譜條件測定，計算橙皮苷平均加樣回收率。從表 1 可以看出，對照品加入量和樣品取樣量中被測成分之和在標準曲線線性范圍內，在擬定的同一色譜條件下 6 次同一供試品溶液中測得橙皮苷的平均回收率為 99. 44%，RSD = 0． 28%，表明橙皮苷在該試驗條件下，加樣回收率良好，符合測定要求。
2． 10 樣品含量測定
取供試品 3 批，按供試品溶液的制備方法制備。分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液各 10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行測定，計算 3 批樣品中橙皮苷的含量。從表 2 可以看出，不同批號的舒肝和胃丸，橙皮苷含量差異較小，說明該藥品質量穩定。
3、 討論
在流動相選擇中，反復試驗比較了不同比例的乙腈-水、乙腈-磷酸溶液、甲醇-水、甲醇-磷酸溶液系統，并從試驗結果的保留時間、基線平穩及樣品穩定性等情況進行了考慮，發現使用甲醇-磷酸溶液作為流動相更理想，同時參考《中國藥典》2010 版一部橙皮苷含量測定進行選擇，最終選定以甲醇-磷酸溶液\\(39∶ 61\\) 作為流動相。
本實驗采用 HPLC 法測定舒肝和胃丸中橙皮苷，旨在對該制劑的質量控制提供一種簡便、易行、結果準確的有效補充方法，為生產企業和檢驗部門更加全面的檢測產品質量提供實驗依據，對確保舒肝和胃丸的質量控制起到參考作用。
參考文獻：
［1］國家藥典委員會． 中華人民共和國藥典［M］． 一部． 北京: 化學工業出版社，2010: 1165．
［2］劉學仁，張瑩，林志群． 橙皮苷和橙皮素生物活性的研究進展［J］． 中國新藥雜志，2011，20\\(4\\) : 329 －333．
［3］曹銘希． 陳皮中橙皮苷的提取及其藥理活性的研究進展［J］． 中國醫藥指南，2012，10\\(12\\) : 452 －454．
［4］吳懷恩，辛華，盧澄生，等． 高效液相色譜法測定佛手配方顆粒中橙皮苷的含量［J］． 中國生化藥物雜志，2011，32\\(2\\) : 139．
