山茱萸為左歸丸方中主要藥味,其主要成分為馬錢苷、莫諾苷、熊果酸和齊墩果酸等.在山茱萸的質量研究中,馬錢苷研究的已較多;而莫諾苷與馬錢苷有相近藥效作用,并且含量更高于馬錢苷,關于莫諾苷含量測定的研究卻很少,是目前山茱萸相關藥物質量控制中的一大缺憾.為了更有效控制左歸丸的質量,本文采用高效液相色譜法同時測定左歸丸中馬錢苷和莫諾苷的含量,為更好地評價藥物提供科學依據.

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀;KQ5200型超聲波清洗器\\(昆山市超聲儀器有限公司\\);BP-211D分析電子天平\\(德國Sartorius公司\\).左歸丸\\(河南宛西制藥股份有限公司,共三批為A、B、C\\).馬錢苷 \\(批號:111640-200401,供 含 量 測 定用\\),購自中國藥品生物制品檢定所.莫諾苷自制,歸一化法測定含量>98.0%.其余試劑均為市售分析純或色譜純,水為純凈水.

2 左歸丸中馬錢苷和莫諾苷的含量測定

2.1色譜條件:安捷倫TC-C18色譜柱\\(4.6mm×250mm,5μm\\),流動相:甲醇-水\\(28∶72\\),檢測波長240nm,柱溫40℃,流速1.0mL/min.理論板數按馬錢苷峰計應不低于2 000.色譜條件與系統適用性試驗:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑\\(4.6mm×200mm,5μm\\),以甲醇-水\\(28∶72\\)為流動相,檢測波長240nm,柱溫40℃,流速1.0mL/min.理論板數按馬錢苷峰計應不低于2 000.

2.21照品各10.0mg,分別置20mL量瓶中,加甲醇溶解,并加至刻度,搖勻,分別作為莫諾苷對照品儲備液和馬錢苷對照品儲備液;再分別精密量取適量上述儲備液置同一量瓶中,加流動相稀釋至每mL含0.05mg的莫諾苷溶液和每mL含0.05mg的馬錢苷溶液,作為對照品溶液.

2.3供試品溶液的制備方法:取左歸丸研細,取約1g,精密稱定,置25mL量瓶中,加甲醇20mL,密塞,超聲處理20min\\(功率150W,頻率50kHz\\),冷卻,稀釋并定容至刻度,搖勻,濾過;精密量取續濾液,用0.45μm濾膜濾過,取續濾液即得.

2.4陰性對照試驗:按處方比例取除去山茱萸的其他藥材適量,依照左歸丸制備工藝和供試品溶液的制備方法得到缺山茱萸的空白對照溶液,作為陰性對照溶液.按照上述色譜條件進行測定,供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,有相同保留時間的色譜峰,而陰性對照色譜上在此保留時間無干擾.

2.5莫諾苷、馬錢苷定量范圍和線性關系:取莫諾苷、馬錢苷對照品儲備液,分別精密吸取0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL置10mL量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻.照含量測定項下色譜條件,取上述對照品溶液各20μL,以進樣量X\\(μg\\)作為橫坐標,測得對照品峰面積Y作為縱坐標,進行線性回歸測得結果見表1,2.可見,莫諾苷在0.191 6~0.958 2μg進樣量范圍內,峰面積與進樣量呈良好的相關性.馬錢苷在0.192 7~0.963 4μg進樣量范圍內,峰面積與進樣量呈良好的相關性.在線性范圍內的進樣量時可以定量測定.

2.6待測溶液的穩定性:取含量測定項下的樣品溶液于0,0.5,1.0,1.5,2.0,3.0,6.0h時分別進樣20μL進行測定,結果表明樣品在6h內穩定.數據見表3.

2.7進樣精密度:取含量測定項下的樣品溶液,連續進樣6次,記錄色譜峰面積,計算進樣精密度.結果見表4.

2.8回收率試驗:精密稱取已知含量的樣品\\(批號A\\)約0.5g,置25mL量瓶,再分別精密加入莫諾苷對照品儲備液0.64mL、馬錢苷對照品儲備液0.46mL置同一25mL量瓶中,按供試品溶液制備方法平行制得6份供試品溶液,依法測定.結果見表5.

2.9重復性試驗:取同一批樣品\\(A\\),共制備6份,照含量測定項下操作,測定每份樣品含量,計算精密度.結果見表6.2.10樣品測定:取左歸丸3批樣品,照含量測定項下方法,測定其中莫諾苷和馬錢苷含量,結果見表7.

3 討論

在中國藥典2010版中,山茱萸藥材以及含山茱萸的成藥中,僅僅測定了馬錢苷成分.而莫諾苷作為具有相同藥理活性的成分,在山茱萸中含量更高,作為評價指標更為科學.本研究對含山茱萸的藥物左歸丸同時進行了馬錢苷和莫諾苷的測定,質量評價指標更為科學.