高效液相色譜法,自上世紀世紀六十年代崛起,經過不斷的發展,從理論、實踐方面日臻完善,應用范圍較廣,涉及醫藥領域、環境保護、生命科學、石化等基礎和應用領域。大多數有機化合物可以用HPLC 來分析測定。在藥物分析機分離中的應用尤其廣泛,發展尤其快速。按分離機理的不同,主要有:吸附色譜法、液-液分配色譜法、離子交換色譜法、分子排阻色譜法、親和色譜法、手性色譜法等。高效液相色譜法自五年版《中國人民共和國藥典》收載以來,在藥物分析領域的應用發展迅速,藥品質量控制中的作用日益突顯,已發展成為一種主流的色譜分析方法。
1 高效液相色譜法在有效成分分析中的應用。
1.1 黃酮類化合物中的應用。
中藥的成分復雜多樣,多數含有黃酮類化合物,也是天然藥物中非常重要的一類化合物,隨著黃酮類化合物的廣泛研究,其分析和分離的手段不斷得到改進,高效液相色譜法在析和分離黃酮類化合物方面的應用也非常廣泛。田娜等人采用制備液相色譜法,從荷葉中分離和制備了一類黃酮化合物。方法是采用 60%乙醇回流提取,粗提取液濃縮,以 D-101 柱與聚酰胺色譜分離,后經 SymmetryPrepTMC18 柱分離,采用水-乙腈為流動相,進行梯度洗脫,流速以5ml/min,最后分析出 3 種黃酮類化合物。利用紫外、紅外、核磁共振、質譜等分析,確定以上三個化合物分別為紫云英苷、異槲皮苷和金絲桃苷。三種化合物的純度都達到了 97%以上。其中紫云英苷為首次從荷葉中分離[1].Justesen 等采用液相質譜聯用技術對 15 種藥材中的黃酮進行了分析和分離,分析發現歐芹的芹菜素含量最高,達到了 510-630mg/100g[2].Chen 等研究漆樹黃酮在小鼠體內的代謝,采用 HPLC 分離漆樹黃酮及其代謝物,并采用質譜和 HPLC,最終確定了代謝產物的化學結構[3].
1.2 皂苷類化合物中的應用。
皂苷類成分也屬于中藥中常見的活性成分,多數沒有紫外吸收,或者只有末端吸收,易受試劑干擾,因此使用紫外檢測法有一定的局限性。采用用高效液相色譜與蒸發光檢測器,可以有效檢測皂苷類成分。在分析浙麥冬、川麥冬中麥冬皂苷 D 含量的應用較好[4],在對酸棗仁中酸棗仁皂苷的含量測定[5],柴胡中柴胡皂苷的含量測定[6],黃芪中黃芪甲苷的含量測定[7],天麻中天麻苷含量測定[8]都取得很好的分析效果。
2 HPLC-ELSD 在中藥分析中的應用。
一方面中藥的化學成分很多,結構復雜,其中一些成分不存在紫外吸收,有的只在紫外末端有吸收。另一方面,色譜分離困難和流動相存在干擾,致使紫外檢測在定性定量方面的分析有一定的難度。而 ELSD 在一定程度上彌補了此方面的不足,因此應用較廣在糖類成分、內酯類成分、皂苷類成分、氨基酸、萜類成分和生物堿類成分等其他成分分析中,得到了較好的分析效果[9].
3 結束語。
中藥成分的復雜性和多樣性卻是現代中藥研究者們所頭疼的問題,同時也在制約中藥制劑的發展和臨床上的應用,中藥的資源不斷地豐富與發展,但質量卻遠遠沒有一個科學的量化標準體系,而實現這些就得通過精密的分析和檢測手段。作者通過對相關資料的查閱,綜述了高效液相色譜法在黃酮、皂苷、糖類等中藥化學成分中的分析和分離方面的應用,HPLC 法具有良好的分離性能、選擇性好、分析速度快、適用范圍廣、樣品用量少、靈敏度高等諸多優點。
參考文獻:
[1]田娜,劉仲華,黃建安,等。高效制備液相色譜法從荷葉中分離制備黃酮類化合物[J].色譜,2007(1):88-92.
[2]Justesen UJ,knuthsen p.Composition of flavnoids in fresh herbsand calculation of flavonoid intake by use of herbs in traditionalDanish dishes [J].Food chemistry,2001(73):245-250.
[3]Chen H,Zuo Y G,Deng Y W.Separation and determination offlavonoids and other phenolic compounds in cranberry juice by high-performance liquid chromatography [J].J.Chromatogr.A.2001,913:387-395.
[4]俞建平,馬月光,邵建峰,等。ELSD-HPLC 法測定浙麥冬、川麥冬中麥冬皂苷 D 含量的方法研究 [J]. 中藥新藥與臨床藥理,2002,13(4):253.
[5]李會軍,李萍。高效液相色譜-蒸發光散射檢測器測定酸棗仁中酸棗仁皂苷 A 及 B 的含量[J].藥物分析雜志,2000,20(2):82.
[6]陳妍。HPLC-ELSD 法測定柴胡中柴胡皂苷 a、d 的含量[J].天津藥學,2002,14(3):73.
[7]田南卉,楊國紅,方穎,等。高效液相色譜-蒸發光散射器測定黃芪甲苷的含量[J].藥物分析雜志,2000,20(3):199.
[8]魏泱,丁明玉,李紅霞。高效液相色譜-蒸發光散射和紫外檢測法測定天麻中天麻甙含量[J].高等學?;瘜W學報,2001,22(4):563.
[9]黃永焯,王寧生。HPLC/ELSD 在天然藥物分析中的應用[J].中藥新藥與臨床藥理,2001,12(6):444.