孕婦金花片由梔子、白芍、金銀花等9味中藥材提取精制而成，具有清熱、安胎的功效。臨床主要用于孕婦頭痛、暈眩、口鼻生瘡、咽喉腫痛等。梔子苷是梔子的主要成分之一，具有瀉火除煩、清熱利尿、涼血解毒等功效[1].白芍的主要成分為芍藥苷，臨床上白芍組方常用于治療多種腹痛以及肋痛、痛經、肢體痙攣痛、頭痛等，具有直接鎮痛作用[2].筆者采用反相高效液相色譜法，研究孕婦金花片中梔子苷和芍藥苷的含量測定方法，為孕婦金花片的質量控制和評價提供參考依據。
1 儀器與試劑
Dionex-P680高效液相色譜儀；上?？茖С晝x器有限公司5200H型超聲波清洗器；AT-201電子分析天 （d=0.01mg,瑞士）；孕婦金花片 （自制）；梔子苷對照品，供含量測定用，中國藥品生物檢定所，批號：110749-200309;芍藥苷對照品，供含量測定用，中國藥品生物檢定所，批號：0736-9508;乙腈為色譜純；水為重蒸餾水 （自制）；甲酸等其他試劑均為分析純。
2 方法與結果
2.1溶液的配制溶液的配制參照文獻 [3~6]進行。
①對照品溶液：取經五氧化二磷減壓干燥器中干燥36h的梔子苷對照品和芍藥苷對照品適量，分別精密稱定，加甲醇制成每1mL含梔子苷90μg、芍藥苷50μg的溶液。
②供試品溶液：取孕婦金花片10片，研勻，取約1g,精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇50mL,密塞，輕輕振搖，稱定重量，超聲處理50min,放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，振搖，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液即得。
③陰性對照溶液：按孕婦金花片處方比例和工藝，制備不含白芍和梔子的陰性樣品。按供試品溶液制備方法制得陰性對照溶液。
2.2色譜條件色譜柱：
Aglient XDB-C18柱 （4.6mm×250mm,5μm）；流動相：乙腈-0.1%甲酸 （12.5∶87.5）;流速：1.0mL/min;柱溫：30℃;檢測波長：236nm[7~9].
2.3系統適用性試驗按照上述色譜條件，取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μL進樣，記錄色譜圖。理論塔板數按梔子苷峰計算不低于11000,按芍藥苷峰計算不低于7000,分離度均大于1.5,峰形對稱，陰性無干擾。結果見圖1、2、3.
2.4標準曲線的制備取兩種對照品適量，分別精密稱定，加甲醇制成濃度為180μg/mL的梔子苷和100μg/mL的芍藥苷的混合對照品溶液，精密量取上述對照品溶液1、2、4、6、8、10mL分別置于10mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻。分別精密量取上述對照品溶液10μL,各進樣2次，按上述色譜條件測定。以峰面積平均值為縱坐標 （Y），以進樣量為橫坐標 （X）繪制標準曲線。結果表明，梔子苷在0.18~1.8μg范圍內線性關系良好，回歸方程為Y=12.982 X-0.0634,r=0.9999;芍藥苷在0.10~1.0μg范圍內線性關系良好，回歸方程為Y=23.088 X-0.0472,r=0.9999.
2.5精密度試驗精密吸取同一對照品溶液，連續進樣6次，測定，結果梔子苷的峰面積RSD為0.6%,芍藥苷的峰面積RSD為0.9%.
2.6穩定性試驗取同一供試品溶液，按上述色譜條件，分別于0、2、4、8、12、24h測定峰面積。結果梔子苷的峰面積RSD為1.2%,芍藥苷的峰面積RSD為0.7%,試驗結果表明，供試品溶液在24h內穩定性良好。
2.7重復性試驗按照含量測定的方法，對同一樣品 （批號：131201）測定6次，結果梔子苷和芍藥苷含量平均值分別為4.3436、2.4047mg/g,RSD分別為1.8%、1.3%.
2.8加樣回收試驗取已知含量的孕婦金花片樣品 （批號：131201）細粉6份，每份約0.4g,精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入對照品溶液20mL,精密加甲醇30mL,按2.1.2項供試品溶液制備方法制備，分別按上述色譜條件測定。結果 （見表1、2）表明本法回收率為分別為99.88%、99.39%,RSD分別為1.5%、1.3%.
2.9含量測定按照上述含量測定方法，測定三批孕婦金花片的含量，采用外標法計算含量，結果見表3.
3 結論
中藥及其制劑很多以梔子苷或芍藥苷為含量測定指標，流動相多采用甲醇-水、乙腈-水、乙腈-磷酸等系統[6~9].筆者采用反相高效液相色譜法，同時測定孕婦金花片中梔子苷和芍藥苷的含量，對測定波長和流動相等條件進行了實驗考察，結果流動相為乙腈-0.1%甲酸 （12.5∶87.5），可使梔子苷和芍藥苷與雜質峰分離情況最佳；檢測波長為236nm,梔子苷和芍藥苷的檢測靈敏度均較高。此方法準確可靠、重現性好，可用于孕婦金花片的質量控制和評價。
[參考文獻]
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