干姜黃芩黃連人參湯出自《傷寒論》之厥陰篇 , 由干姜、黃芩、黃連、人參 4 味中藥組成 , 用于治療胃熱嘔吐兼腸寒腹痛、下利、腸鳴之上熱下寒之證.現代臨床多用于治療胃腸炎[1]、消化性潰瘍[2]、腹瀉、糖尿病[3]等疾病.干姜芩連人參煎膏劑是在原方基礎上進行劑型的改良 , 為了能夠有效地控制該制劑的質量、保證其穩定性 , 本課題參考《中國藥典》[4]及相關資料 , 采用 HPLC 法對本制劑中主藥之一黃芩中黃芩苷的含量進行測定.現報告如下.
1 材料與方法
1. 1儀器與試藥 紫外線分析儀 \\(ZF-I 型 , 上海顧村電光儀器廠 \\);高效液相色譜儀 \\(Waters1515 型 , 美國 Waters 公司 \\);對照品黃芩苷 \\( 批號 :110715-201117\\) ;甲醇為色譜純試劑 ;水為二次蒸餾水 , 其他試劑均為分析純 , 煎膏劑自制 \\( 批號分別為 150201、150202、150301、150302、150401、150402\\).
1. 2方法
1. 2. 1色譜條件 色譜柱:AgilentExtendODS反相柱\\(4.6mm×250 mm, 5 μm\\) ;流動相 :甲醇 - 水 - 磷酸 \\(45:55:0.2\\) ;檢測波長 :278 nm ;流速 :1.0 ml/min ;柱溫 :室溫.
1. 2. 2溶液的制備
1. 2. 2. 1供試品溶液的制備 精密量取樣品 0.3 ml, 置 50 ml容量瓶中, 加入60%甲醇定容至刻度, 搖勻, 過濾, 取續濾液,作為供試品溶液.
1. 2. 2. 2對照品溶液的制備 取黃芩苷對照品適量 , 精密稱定 , 加甲醇溶解制成 55 μg/ml 的溶液 , 作為對照品溶液.
1. 2. 2. 3陰性樣品溶液的制備 按處方制備不含黃芩藥材的模擬制劑 , 精密量取 0.3 ml, 按照 1.2.2.1 法制備成缺黃芩的陰性樣品溶液.
1. 2. 3最佳吸收波長的確定 以流動相作為空白對照 , 將黃芩苷對照品溶液和供試品溶液在 200~600 nm 內進行光譜掃描 , 結果黃芩苷在 278 nm 處顯示有最大吸收.因此選擇278 nm 作為檢測波長.
2 結果
2. 1專屬性試驗 分別精密吸取供試品溶液、對照品溶液與陰性樣品溶液各 10 μl, 注入液相色譜儀中 , 記錄 3 份溶液的色譜圖.結果表明 , 陰性樣品在與黃芩苷峰相近的保留時間內出現兩個干擾峰 , 但測得兩峰峰面積均為供試品峰面積的 2%以下 , 因此可以說明陰性對黃芩苷的測定無影響 , 本方法專屬性良好.
2. 2線性關系的試驗 精密稱取黃芩苷對照品適量, 加甲醇制成每 1 毫升含 0.203 mg 的對照品貯備液.精密吸取上述貯備液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 ml, 分別置于 10 ml 量瓶中 , 加甲醇稀釋至刻度 , 搖勻.分別精密吸取上述溶液 10μl, 注入液相色譜儀中 , 以進樣量為橫坐標 , 色譜峰面積為縱坐標 , 繪制標準曲線 , 得回歸方程 Y=2.88×107X+7.45×104,r=0.9992, 結果表明黃芩苷在 0.0203~0.1421 mg/ml 內線性關系良好.
2. 3精密度試驗 精密吸取供試品溶液 10 μl, 注入液相色譜儀中 , 重復進樣 6 次 , 測定黃芩苷峰面積 , RSD 為 1.62%.結果表明儀器精密度良好.
2. 4重復性試驗 量取同一批樣品 0.3 ml, 6 份 , 制成樣品溶液 , 進樣 10 μl, 記錄峰面積.計算得黃芩苷含量平均值為70.25 μg/ml , RSD 值為 2.26%.表明重現性較好.
2. 5穩定性試驗 精密吸取供試品溶液 10 μl, 每間隔 1 h 進樣 1 次 , 8 h 內測定黃芩苷峰面積 , RSD 值為 1.86%.結果表明供試品溶液在 8 小時內穩定性良好.
2. 6加樣回收率試驗 量取樣品共 6 份 , 分別精密加入1.75 mg/ml 的對照品溶液 1 ml, 按 2.2.1 法制成樣品溶液 , 照樣品含量測定方法進行測定 , 計算回收率.見表 1.該法測定黃芩苷的含量方法學合理 , 準確、可靠.【1】
2. 7取 6 批中試產品 \\( 批號分別為 150201、150202、150301、150302、150401、150402\\), 按供試品溶液制備方法制備 , 精密吸取 10 μl 樣品溶液進樣 , 測定黃芩苷含量分別為 11.71 mg/ml、11.86 mg/ml、15.27 mg/ml、15.04 mg/ml、13.49 mg/ml、13.88 mg/ml.
3 小結
黃芩為方中君藥之一 , 在本制劑的臨床療效中起著重要作用 , 所以對其有效成分黃芩苷進行了定量研究 , 結果表明 ,黃芩苷含量測定方法操作簡便 , 專屬性強 , 回收率高[5-8].
本方法的建立 , 可使干姜芩連人參煎膏劑的質量得到控制 ,以確保其在臨床應用的安全有效.
參 考 文 獻
[1] 陳巖 . 干姜黃芩黃連人參湯治療慢性結腸炎 56 例療效觀察 . 新中醫 , 2010, 42\\(10\\):38-39.
[2] 徐州 , 周德端 , 段國勛 , 等 . 干姜芩連人參湯治療消化性潰瘍臨床觀察 . 四川中醫 , 1994\\(1\\):23-25.
[3] 金末淑 , 陳欣燕 , 姬航宇 , 等 . 仝小林教授運用干姜黃芩黃連人參湯治療 2 型糖尿病辨證要點分析 . 云南中醫學院學報 , 2011,34 \\(1\\):32-34.
[4] 國家藥典委員會 . 中華人民共和國藥典 . 北京 : 化學工業出版社 , 2010:116.
[5] 彭智平 . 基于干姜黃芩黃連人參湯臨床有效的煮散工藝研究及其藥效學分析 . 中國中醫科學院 ,2014:15-16.
[6] 鄭德柱 . 干姜黃芩黃連人參湯臨床應用 . 河北中醫 , 1991\\(5\\):125-126.
[7] 胡俊輝 . 干姜黃芩黃連人參湯中 11 種藥效成分的 RP-HPLC測定 . 中藥新藥與臨床藥理 , 2014, 1\\(1\\):77-81.
[8] 陳欣燕,金末淑,姬航宇 , 等 . 仝小林教授運用干姜黃芩黃連人參湯治療 2 型糖尿病 80 例臨床觀察 . 中華中醫藥雜志 ,2013\\(2\\):463-465.
