氨基酸的測定有多種方法,以前我們用的較多的是比色法[1],由于比色法準確性不高,結果也易受外界因素干擾,所以現在我們很少用它來測定氨基酸的含量了?,F在我們常用的是氨基酸自動分析儀法[2]和HPLC法[3].HPLC法測定準確度高,但測量成本較高,多樣本測量費用太大,而且對操作人員技術要求也較高。而氨基酸自動分析儀法操作簡單、準確、自動化程度和靈敏度高,便于多樣本數據的測定。本文利用121MB型氨基酸自動分析儀(美國貝克曼公司)測定甘肅鼢鼠骨骼中氨基酸的含量,為進一步開發甘肅鼢鼠骨骼藥用價值提供最基礎的數據資料。
1 實驗材料
1.1 實驗動物
1歲齡以上甘肅鼢鼠10只(體重200±20g),雌雄不限,采集地點:陜西延安,采集時間:2013年10月。
2 實驗方法
2.1 骨骼的制備
甘肅鼢鼠麻醉處死,半小時內剝皮剔肉,取下所有的骨骼,去離子水沖洗3~5遍,于30℃恒溫箱中烘干,用粉碎機充分粉碎后再碾磨,裝袋備用。
2.2 樣品液配制
準確稱取樣品100mg于燒杯中,先加入6mol·L-1HCL充分攪拌,然后110℃水解22h,放置冷卻,待測。
2.3 樣品檢測
待測樣品依次放入121MB型氨基酸分析儀(美國貝克曼公司),測定樣品中各種氨基酸含量。
2.4 數據統計
一份樣品檢測3次檢測結果以平均值表示。
3 實驗結果與討論
3.1 甘肅鼢鼠骨骼中氨基酸含量的質量分數如表 1 所示。
由表1可知,甘肅鼢鼠骨骼中常見氨基酸含量豐富,其中藥用價值較高的羥脯氨酸含量較高,這是由甘肅鼢鼠的食性決定的,甘肅鼢鼠是一種地下鼠,它主要靠挖掘采集食物,喜歡植物的根和一些埋在地下的植物,比如馬鈴薯、蘿卜等,其次喜食含粗纖維、粗脂肪較多的落葉松、油松等林木的根部[4],其體內的羥脯氨酸可能來源于這些食物,是長期食用它們沉積在骨骼里的結果,而植物中氨基酸的含量與它生長的土壤有關[5].
4 結論
在多樣本氨基酸分析方面,氨基酸自動分析儀有簡單易操作的優勢,準確度也較高,可以直接對氨基酸進行分析,避免了其他物質和衍生物的干擾,能快速、準確地定量氨基酸。本實驗對甘肅鼢鼠全身骨骼氨基酸進行了測定,發現藥用價值高的羥脯氨酸含量較高,而羥脯氨酸被認為是虎骨中藥用價值最高的氨基酸[6],所以甘肅鼢鼠骨骼具有開發成新一代虎骨替代品的潛質。
參考文獻:
[1]李景紅,楊再山,孟祥晨。比色法檢測乳中摻加的動物膠原水解蛋白。中國乳品工業[J].2007,35(9):50-52.
[2]陳雄偉,王桂芬。用835-50型氨基酸自動分析儀對羥脯氨酸的測定方法。氨基酸雜志[J].1985,4:5-6.
[3]高建華,寧正祥。禽畜皮和魚鱗的基本成分及氨基酸組成分析?,F代食品科技[J].2007,23(12):77-79.