小血管因其體積微小、組織薄弱，按照常規的石蠟包埋方法，在脫水透明浸蠟等過程中，由于器械夾持、加熱等因素，很容易塌陷變形甚至損壞，最終得不到管腔較為規則和完整的血管光鏡切片。為了解決這一困難，該研究采用瓊脂預先包埋小血管再進行常規石蠟包埋制作光鏡切片的方法和效果，并與單純石蠟包埋法得到的結果進行了比較，現報道如下。

1、 材料與方法

1． 1 材料與試劑 以 4% 多聚甲醛固定好的昆明鼠胸主動脈為例，其血管管徑約 1 mm，長度約 1. 3cm，見圖 1。普通瓊脂粉，規格為 1 ml 的一次性普通醫用注射器，眼科剪，眼科鑷，大頭針，常規脫水包埋及 HE 染色所用試劑等。

1． 2 操作步驟

1． 2． 1 小血管預處理 將固定好的小血管分割成0. 5 ～ 1. 0 cm 若干段，或根據需要選擇包埋長度。為了便于觀察血管的位置，預先用伊紅將血管染紅。

1． 2． 2 瓊脂預包埋 準備1 ml注射器，切去注射器乳頭靠后部分。將普通瓊脂粉預先配成 1. 5% 瓊脂粉懸濁液，再放入微波爐中低火加熱至50 ℃左右成液體狀態，再將處理過的注射器活塞往外拉出 1. 5～ 2. 0 ml 距離作為模子，用移液槍將熔化的瓊脂液加入注射器前端空缺處，并迅速將小血管段放入瓊脂中，用縫衣針或大頭針調整血管在瓊脂中的位置，盡量使血管段居中，并用針尖小心探入血管管腔內，將其塌陷的部分挑起來使管腔成為規則的圓形腔。待瓊脂冷卻凝固后，將注射器活塞往前推出獲得瓊脂柱。

1． 2． 3 脫水再包埋 包含有血管段的瓊脂柱作為一個整體再按照常規的脫水包埋程序做石蠟包埋。最后一步石蠟包埋時將瓊脂柱豎立放于石蠟包埋模子中，并在其周圍充滿熔化的石蠟，便于后期切片。

1． 2． 4 切片和染色 包埋完畢后切片，石蠟切片厚度為 3 μm，染色采用常規 HE 染色。

2、 結果

瓊脂石蠟雙包埋法包埋的小血管組織塊切片染色后，可觀察到管腔完整和規則的血管橫斷面，血管內膜等組織結構保存較完好，幾乎沒有損壞和丟失。而單純石蠟包埋法包埋的小血管組織塊切片染色后，可觀察到血管管壁打折和貼附在一起，變形甚至破裂的現象。

3、 討論研究

表明瓊脂石蠟雙埋法在制作一些精細組織的光鏡切片上有著很大優勢，該研究應用在小血管的包埋和制片上也證實了這一點。采用瓊脂石蠟雙包埋法可保持小血管的管腔完整性和規則性，小血管內膜等組織結構保存較完好，幾乎沒有損壞和丟失，切片得到較為理想的結果。然而采用單純石蠟包埋法包埋的小血管，在脫水包埋等操作過程中，血管的管壁容易貼在一起，且容易變形甚至破裂，最終得不到令人滿意的光鏡切片。

瓊脂塊脫水浸蠟加熱之后體積會固縮一半以上，然而為了保證脫水完全，瓊脂包埋塊又不能過大，本實驗證明課題組自制的 1 ml 注射器瓊脂包埋模子較為適合管徑為 1 ～3 mm 的小血管包埋所用，體積大小適中，且可以極為方便的將包埋瓊脂塊從模子中取出，避免了用器械從其他類型的瓊脂包埋模子中取出瓊脂塊時，容易將已經包好組織的瓊脂塊夾爛碰損的情況發生。

包埋所用瓊脂濃度不宜過高也不宜過低。高濃度瓊脂\\(3% 以上\\)，使用相同劑量的脫水劑不能完全脫水，最終瓊脂和石蠟不能很好的融合在一起，無法正常切片，推測原因可能是瓊脂液密度過高導致瓊脂塊內部分子間隙過窄，脫水劑等不易浸入其內部。經過濃度梯度對照試驗表明質量分數為 1. 5%瓊脂用于包埋較為合適;瓊脂濃度過低則不能很好的凝固，而且脫水之后嚴重固縮亦不能獲得良好的效果。

用瓊脂預包埋小血管最大的優勢是在瓊脂包埋血管時可以調整和恢復在取用或固定等操作時發生塌陷變形的血管原有的圓形管腔，且在整個脫水包埋過程中都起到一個很好的支撐和保護作用，使血管在其中不易被器械夾損，也不容易因加熱等因素而變形和損壞，更為重要的一點是切片時遺留的瓊脂具有黏附作用，染色洗片時不易掉片。

瓊脂石蠟雙包埋法還可適用于組織工程血管的包埋，因為血管脫細胞后失去彈性支撐會變得更加柔軟，管腔更容易塌陷。本課題組用該方法包埋組織工程血管亦獲得良好的效果。

瓊脂石蠟雙包埋法彌補了單純石蠟包埋小血管時易損壞血管以致難以獲得管腔完整和規則的血管光鏡切片的不足，在小血管的光鏡制片上具有明顯的優勢。該方法操作簡便快捷，使用材料價格低廉，對條件一般的實驗室開展動物實驗有一定的實用價值。