1 引 言。
近年來，碳納米發光材料的低毒性和強熒光性質受到了越來越密切的關注[1-2].石墨烯量子點作為碳量子點的一種，一般尺寸小于 10 nm,因此比一維的石墨烯量子帶和二維的石墨烯量子片表現出更強的量子限域效應和邊界效應[3],在生物、醫藥和材料等方面展現出更加誘人的應用前景[4-5].石墨烯量子點的合成方法研究頗多，如電化學氧化法[6]、機械剝離法、氧化石墨還原法、化學氣相沉淀法、電弧法[7]、有機合成等。目前量子點在金屬離子的識別和檢測領域研究較多，但在藥物分子分析領域的研究還很少。
腎上腺色腙又稱安絡血或卡巴克絡（ Carba-zochrome,CBZC） ,臨床主要用于腦、肺、腎、腸毛細管損傷出血及血小板減少癥狀[8].目前腎上腺色腙的測定方法主要有近紅外光譜法[9]、分光光度法[10]、高效液相色譜法[11]、化學發光法[12]及熒光分析方法[13]等。
本文采用自上而下的方法高溫裂解檸檬酸合成了具有優良熒光特性的 GQDs,并對其進行修飾，發現 GQDs 發出很強的藍色熒光。腎上腺色腙對 GQDs 熒光強度有明顯的猝滅作用，據此建立了一種測定腎上腺色腙的新方法，并對其作用機理進行了研究。
2 實 驗。
2. 1 儀器及試劑。
2. 1. 1 儀器。
F-4500 型熒光分光光度計（ 日本日立公司） ;8453 型紫外-可見分光光度計 （ 美國安捷倫公司） ; FLSP920 瞬態穩態熒光光譜儀（ 英國愛丁堡公司） ; IR Prestige-21 型傅里葉變換紅外光譜儀（ 日本 Shimaozu 公司） .
2. 1. 2 試劑。
濃度為 1. 0 ×10- 3mol / L CBZC 標準溶液； 濃度為 10 mg/mL 的 NaOH 溶液； Tris-HCl 緩沖液（ pH =7. 40） ; 檸檬酸。所用試劑均為分析純，水為 UP 超純水。
CBZC 標準溶液的配制： 準確稱取腎上腺色腙標準品（ 中國藥品生物制品檢定所） 0. 023 6g,用蒸餾水溶解并定容至 100 mL,放置冰箱中待用。
2. 2 實驗方法。
2. 2. 1 GQDs 的合成。
在文獻[1]的基礎上，另外引入了 PEG 進行修飾，采用自上而下的方法裂解檸檬酸合成GQDs.具體方法為： 準確稱取 1. 000 0 g 檸檬酸和0. 500 0 g PEG2000 放入小燒杯中，用電熱套直接加熱，檸檬酸開始裂解。5 min 后，檸檬酸熔解為無色液體； 繼續加熱，溶液由無色變為亮黃色。
將溶液轉移到30. 00 mL 的 NaOH 溶液中（ 10 mg/mL） ,連續攪拌，反應完全后轉移、稀釋至 250 mL容量瓶中，放置在冰箱里待用。GQDs 的濃度以檸檬酸的量計算。該合成方法具有簡單、快速的優點。
2. 2. 2 熒光光譜圖的測定。
移取 3. 00 mL GQDs 于 25 mL 比色管中，加入 3. 00 mLTris-HCl 緩沖溶液，再加入適量腎上腺色腙溶液，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。室溫下反應20 min 后，于 F-4500 型熒光分光光度計測定熒光光譜圖，測定體系熒光強度（ F） 和試劑空白（ F0） ,計算 ΔF 和 CBZC 濃度之間的關系。激發波長和發射波長為 λex/ λem= 367 /462 nm,狹縫寬度均為 5 nm.
3 結果與討論。
3. 1 GQDs 的特性。
3. 1. 1 GQDs 的熒光光譜、紫外-可見吸收光譜和熒光壽命圖 1 為 GQDs 的熒光光譜和紫外-可見吸收譜。從圖中可看出修飾前后量子點的最大吸收波長并無變化。在462 nm 處出現最大熒光發射峰，與文獻報道的 GQDs 的熒光特性也相吻合； 但修飾后的量子點熒光強度明顯增大，熒光量子產率增加，且發射峰的半峰寬較窄，說明該量子點單一、均勻。
我們于 FLSP920 瞬態穩態熒光光譜儀上測定了該 GQDs 的熒光衰減曲線，擬合結果如圖 2所示。根據加權平均計算法[14],得出 GQDs 的熒光壽命為 1. 87 ns,熒光壽命較短，據推測可能是激子（ 電子與空穴對） 的重組合發光[15].χ2接近于 1,說明實驗數據在可信范圍內。
3. 1. 2 GQDs 的結構表征。
量子點的光致發光是其非常重要的特性之一。量子點具有寬而連續的激發譜，可實現一元激發和多元激發，為實現生物分子的多組分同時檢測提供了可能。目前很多實驗發現，量子點的發射峰強度和位置與激發波長有關。本實驗于F-4500 型熒光分光光度計上檢測不同激發波長下的 GQDs 熒光強度，所有測試均在 298 K 下進行。改變激發波長，發射峰位置和強度也隨之發生變化，如圖 3 所示。當激發波長由 340 nm 增加到400 nm 時，發射波長由444 nm 紅移至488 nm,同時熒光強度先增大后減小。當激發波長為 367nm 時，熒光強度達到最大。
圖 4 為 GQDs 的紅外光譜圖： 1 399 cm- 1和1 578 cm- 1處 檢 測 到 有 強 的 吸 收 峰，分 別 為-COO-的對稱伸縮振動和反對稱伸縮振動；1 725 cm- 1為- C \ue5caO 的特征吸收峰； 2 914 cm- 1附近有兩個強度很弱的雙峰，可能為 C-H 的對稱與反對稱伸縮振動吸收峰； 3 433 cm- 1為-OH的伸縮振動峰。根據分析得知該量子點含有羧基和羥基，所以有很好的親水性[16].
3. 1. 3 不同酸度對量子點熒光強度的影響。
溶液的酸度對量子點的發光強度有一定影響，因此，本實驗研究了 GQDs 在不同酸度下的熒光強度及穩定性。在酸性介質中，其熒光強度??；在中性和堿性條件下，GQDs 的熒光強度明顯增大，且不隨 pH 的變化而變化，表明 GQDs 在中性和堿性條件下熒光穩定。
3. 2 腎上腺色腙的測定。
3. 2. 1 熒光光譜圖。
室溫下，固定激發和發射波長，掃描體系的熒光光譜圖，結果如圖 5 所示。由圖可知，腎上腺色腙對 GQDs 有明顯的熒光猝滅作用，且 GQDs 的熒光強度隨著腎上腺色腙濃度的增加有規律地下降，說明腎上腺色腙和量子點發生了相互作用。
