知母飲片來源于百合科植物知母 Anemarrhenaasphodeloides Bge.的干燥根莖。知母性味苦、甘、寒,歸肺、胃、腎經,能清熱瀉火、滋陰潤燥?,F代研究表明,知母具有抗菌、解熱、利膽等方面的藥理作用。
指標成分芒果苷(mangiferin),又名芒果素、知母寧,是從百合科植物知母中提取的天然多酚類化合物,分子式:C19H18O11,分子量:422.2010版中國藥典規定,知母飲片含芒果苷不得少于0.5%[1].芒果苷具有多方面的藥理作用,如能明顯的興奮中樞神經系統、能增強心肌收縮力[2]、還能抗病毒[3]、抗腫瘤[4]等。
河北易縣是知母的道地產地,因品質優良、療效好而被稱為“西陵知母”.由于野生資源無法滿足市場需求,知母現已在中國北方大規模人工栽培,特別是河北和安徽兩省產量很大。本實驗通過對不同產地和采收期的知母飲片進行檢測,從而為知母飲片的篩選提供依據。
1 儀器與試藥。
1.1 儀器:高效液相色譜儀:Agilent 1100 型;檢測器:UV(VWD);色譜工作站:Agilent.
1.2 藥品與試劑:芒果苷對照品采購自中檢院,批號為111607-200402;流動相乙腈為色譜級,其余試劑均為分析純。
1.3 實驗材料:市售知母飲片均采購自安徽賀林中藥飲片公司。經臺州市食品藥品檢驗所鑒定為均符合《中國藥典》2010年版一部規定。
2 實驗方法和結果。
2.1 色譜條件及系統適應性試驗:色譜柱:WatersHPLC C18柱(4.6﹡250mm,5μm);流動相:乙腈-0.1%磷酸水溶液(18:82);流速:1.0ml/min;柱溫:25℃;進樣量:10μl;檢測波長:258nm.在上述色譜條件下,理論塔板數按芒果苷峰計算,應不低于6000.對照品和典型樣品圖譜見圖1、圖2.
2.2 對照品溶液的制備:取芒果苷對照品適量,精密稱定,加稀乙醇制成每1ml含50μg的溶液。
2.3 供試品溶液的制備:取知母飲片粉末(過3號篩)約0.1g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入稀乙醇25ml,稱定重量,超聲處理(功率400W,頻率40kHz)30分鐘,放冷,再稱定重量,用稀乙醇補足減失的重量,搖勻。濾過,取續濾液,即得。
2.4 標準曲線:精密吸取對照品溶液 1μl、3μl、5μl、7μl、10μl、13μl分別進樣,以對照品進樣量Y(μg)為縱坐標,峰面積積分值x為橫坐標,得直線回歸方程為:Y=0.0003x+0.0011,r=0.9991,在0.05~0.65μg范圍內線性關系良好。
2.5 精密度試驗:精密吸取上述對照品溶液各10μl,連續進樣6次,芒果苷峰面積的平均積分值為1700.3,RSD為1.2%(n=6)。
2.6 重現性試驗:取同一批次的飲片粉末精密稱定,按2.1項、2.3項測定6次,飲片芒果苷平均含量為1.28%,RSD為0.9%.
2.7 穩定性試驗:取上述對照品溶液室溫放置,分別在0、12、24、36、60、72h測定,峰面積的RSD為1.12%,表明對照品溶液在72h內穩定。
2.8 加樣回收率:精密稱取飲片粉末6份,各加入一定量的對照品,按2.1、2.3項下操作,由回歸方程計算樣品中各對照品的量,芒果苷平均回收率為99.38%.
3 討論。
本法參考藥典用高效液相色譜法測定知母飲片中芒果苷的含量,比較了多種比例的流動相包括乙腈-水、甲醇-水、乙腈-冰醋酸水溶液、乙腈-磷酸水溶液、甲醇-磷酸水溶液的分離效果,結果以乙腈-磷酸水溶液(18:82)的分離效果為優,分離度較好,保留時間適中,無干擾雜峰。市售知母飲片由于產地的不同,芒果苷含量變化很大。知母傳統道地產地為河北省易縣,近年來在全國各地進行了大規模引種。河北安國和安徽亳州是目前種植規模最大的兩個主要產地。從芒果苷含量檢測結果看,安徽和河北樣品均明顯好于其它省份,安徽亳州所產飲片與河北安國和易縣所產飲片沒有明顯差別。這也說明,安徽和河北仍然為知母飲片的最重要產地。
傳統的知母采收期一般為3年。而從表3可以看出,芒果苷含量隨種植年份加長有明顯的下降,說明知母飲片以1年生采收為宜,這與傳統的認識有很大的出入。由于收集到的樣品量較少,如綜合考慮藥材產量及其它指標性成分等因素,對采收時間還需進行更深入的研究。
4 參考文獻
[1] 國家藥典委員會。中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社,2010:198
[2] 余勝民,鐘鳴。 芒果苷藥理研究進展[J].中國中醫藥科技,1999,6(3):F00
[3] Zheng M S,Lu Z Y,Antiviral effect of mangiferinand iso-mangiferin on herpes simplex virus[J]. ChinMed J (Engl),1990,103(2):160.
[4] Guha S,Ghosal S,Chattopadhyay U.Antitumor,immu-nomodulatory and anti- HIV effect of mangiferin,anaturally occurring glucosylxanthone[J].Chemothera-py,1996,42(6):443.