B 族鏈球菌 \\(group B Streptococcus, GBS\\) 也叫無乳鏈球菌［1］, 是一種兼性厭氧革蘭陽性鏈球菌 , 屬于條件致病菌 ,常寄居陰道及胃腸道 , 也可寄居于嬰幼兒上呼吸道 , 臨床常通過細菌培養、GBS 核酸檢測等進行 GBS 篩檢。據相關研究報道［2］, 正常孕婦陰道中 GBS 的檢出率為 6.5%~36.0%, 孕婦圍產期感染 GBS 是引發胎膜早破、新生兒敗血癥、新生兒宮腔感染、腦膜炎、肺炎等疾病的重要因素之一 , 有研究證實 , 對 GBS 陽性孕婦采取抗生素治療 , 對有效降低新生兒感染率、發病率均具有重要意義。本文分析研究圍生期孕婦B 族鏈球菌 \\(GBS\\) 感染和耐藥性檢測對妊娠結局的影響?？偨Y報告如下。
1 資料與方法
1. 1一般資料選取 2013 年 2 月 ~2014 年 2 月本院婦產科接診的 410 例產期孕婦 , 年齡 22~37 歲 , 平均年齡 \\(28.2±1.6\\)歲 , 孕期 35~37 周 , 所有產婦均知悉本組研究目的 , 自愿參與本實驗并簽署知情同意書。
1. 2方法
1. 2. 1儀器及試劑① GBS 培養鑒定 ：采用 Todd-Hewrtt肉湯、小牛血清、哥倫比亞血瓊脂 \\( 英國 OXOID 公司 \\), GBS鑒定采用 rapidID32STAEP 鑒定板條 \\( 法國生物梅里埃公司 \\)。② GBS 藥敏定量試驗：采用 VITEK-2 全自動鑒定藥敏儀 \\( 法國梅里埃\\), 質控菌株肺炎鏈球菌ATCC4961［9中國衛生部\\(現衛計委 \\) 臨床檢驗中心］。③ PCR 檢測 ：實時熒光 PCR 儀選用 CFX96 實時熒光定量 PCR 儀 \\( 美國 Bio-Rad 公司 \\), PCR檢測試劑采用B族鏈球菌核酸檢測試劑盒［泰普生物科學\\(中國 \\) 有限公司］。DNA 提取試劑 \\( 美國 Qiagen 公司 \\)。
1. 2. 2標本采集由醫師規范采集陰道和直腸拭子標本各2 份。參照美國疾病預防控制中心在《圍生期 GBS 預防指南》中推薦的取材方法［3］, 于孕 35~37 周取材 , 不使用陰道窺器 ,清除外陰分泌物后 , 將 2 根無菌陰道棉拭子同時置入陰道內下 1/3 處 , 旋轉 1 周 , 采集陰道分泌物 ；將兩根棉拭子同時插入肛門 , 于肛門括約肌上 2~3 cm 處輕輕旋轉 , 采集直腸分泌物 , 每位孕婦均采集兩份標本 , 一份 \\( 陰道拭子 + 肛拭子 \\)用于實時熒光 PCR 檢測 , 一份用于細菌培養。
1. 2. 3GBS 的分離培養及鑒定 標本盡快送至實驗室 , 將拭子置于 3 mg/ml Todd-Hewrtt 肉湯 \\( 含茶噬酸 15 Hg/ml+ 慶大霉素 8 Hg/ml\\), 在 35℃環境中增菌培養 18~24 h, 然后分別接種于小牛血清和羊血脂平板培養基 , 在 35℃ CO2濃度 5% 的環境中培養 24~36 h, 選擇有 β 溶血環的菌落 , 通過革蘭染色鏡檢查陽性 , 觸酶試驗陰性 , 將菌落接種于 rapidID32STAEP鑒定板條 , 在 37℃中培養 4 h, 讀取結果 , 采用 VITEK-2 進行B 群鏈球菌細菌藥敏 MIC 實驗。
1. 2. 4定量 PCR 檢測提取陰道分泌物核酸 DNA, 將陰道拭子浸于 1mlTris-HCl 溶液中 ,加入溶菌酶至濃度至 100μg/ml,在37℃環境下震蕩 3 min, 加入蛋白酶 K 至 200 μg/ml, 在 56℃條件下反應 3 h, 然后以 10000 r/min 離心 5 min, 取 200 μl 上清液提取 DNA, 具體步驟按照 DNA 提取試劑盒說明書操作。
GBS 的 PCR 檢測按照 GBS 核酸檢測試劑盒說明進行操作。
GBS 核酸熒光定量 PCR 檢測按照 GBS 核酸熒光定量 PCR 試劑盒說明書進行操作。
1. 2. 5擴增測序送上海生工生物工程股份有限公司測試分析。
1. 3觀察指標①實時 PCR 法與培養法檢測 GBS 感染結果的對比 ；② GBS 藥敏試驗結果 ；③圍生期孕婦 GBS 感染陽性者與陰性者的妊娠結局。
1. 4統計學方法采用SPSS17.0統計學軟件進行統計分析。
計數資料以率 \\(%\\) 表示 , 采用χ2檢驗。
P<0.05 表示差異具有統計學意義。
2 結果
2. 1實時 PCR 法與培養法檢測 GBS 感染結果的對比本組 410 例孕婦中 , 經培養法檢測陽性者 23 例 , 陽性率為 5.5%\\(23/410\\), 實時 PCR 法檢測陽性者 41 例 , 陽性率為10.0%\\(41/410\\), 兩種檢測方法的陽性檢出率比較差異具有統計學意義 \\(χ2=5.491,P<0.05\\) ；以分離培養法為標準 , 實時熒光 PCR 法檢測圍產期孕婦 GBS 感染的敏感性為 100%\\(23/23\\),特異性為 95.6%。
2. 2培養法分離出 GBS 的耐藥性檢測結果培養法共檢出23 例 GBS 陽性者 , 對其進行進行藥物敏感 MIC 實驗 , 敏感度見表 1。
2. 3PCR 法檢測 GBS 感染陽性者與陰性者妊娠結局的對比GBS 陽性組與陰性組在早產發生率方面差異無統計學意義 \\(P>0.05\\), GBS 陽性組胎膜早破、宮內感染的發生率明顯高于陰性組 , 差異有統計學意義 \\(P<0.05\\), 見表 2?！?】
3 討論
GBS 是一種常寄居陰道及胃腸道的兼性厭氧革蘭陽性鏈球菌 , 多項研究表明［4, 5］, 圍生期 GBS 感染會導致妊娠不良結局 , 據相關研究報道［6］, 我國妊娠婦女 GBS 帶菌率為3.5%~32.4% , 研究 GBS 的檢測方法、耐藥性均對指導臨床治療具有重要意義。本組研究以 410 例產期孕婦作為研究對象 ,于孕 35~37 周時取孕婦陰道下 1/3 分泌物及肛周分泌物拭子 ,采用實時定量 PCR 和培養法法進行 GBS 檢測 , 對培養分離出的 GBS 進行藥敏試驗 , 結果顯示 , 實時 PCR 檢測、培養法檢測圍產期 GBS 感染陽性率分別為 10.0% 和 5.5%, 均在上述研究報告的范圍內 , 但二者差異顯著 , 實時 PCR 檢測的陽性率明顯高于培養法。除此之外 , 培養法檢測會受到標本采集、運送、培養條件等因素的影響 , 因而檢出率會存在一定的變化 ；而實時 PCR 檢測可有效規避上述因素 , 且檢測時間僅為4 h, 本組研究中實時 PCR 檢測的敏感性為 100%\\(23/23\\), 特異性為 95.6%。由此可見 , 其有望成為妊娠晚期檢測 GBS 感染的首選方法。本組研究中對培養法共檢出 23 例 GBS 陽性標本進行藥物敏感 MIC 實驗 , 結果顯示 , GBS 對青霉素 、萬古霉素、氨芐青霉素、頭孢噻肟的敏感率均為 100.0%, 對左氧氟沙星的敏感率為 68.8%, 對克林霉素、阿奇霉素、紅霉素的敏感率分別為 59.2%、45.2% 和 34.6%, 提示青霉素、氨芐青霉素為預防妊娠期 GBS 感染的理想抗生素 , 這與陳惠玲等［7］、Regan 等［8］研究結論具有一致性。本組 410 例孕婦中 , GBS 陽性組與陰性組在早產發生率方面無明顯差異 ,GBS 陽性者組胎膜早破、宮內感染的發生率明顯高于陰性者組 \\(P<0.05\\), 說明 GBS 感染會增加妊娠晚期孕婦宮內感染及胎膜早破的發生率 , 與李亞梅等［9］研究結論吻合 , 可進一步證實 , 圍產期 GBS 感染會導致妊娠不良結局。
綜上所述 , 實時 PCR 檢測可作為孕晚期檢測 GBS 感染的一種快速準確的方法 ；青霉素、氨芐青霉素為預防妊娠期GBS 感染的理想抗生素 ；GBS 感染會增加妊娠晚期孕婦宮內感染及胎膜早破的發生率。
參 考 文 獻
［1］ 孫丹華 , 王李利 , 張磊 , 等 . 妊娠 35~37 周孕婦Ｂ族鏈球菌帶菌與妊娠結局 . 中國婦產科臨床雜志 , 2013, 14\\(4\\):312-314.
［2］ 時春艷 , 曲首輝 , 楊磊 , 等 . 妊娠晚期孕婦 B 族鏈球菌帶菌狀況的檢測及帶菌對妊娠結局的影響 . 中華婦產科雜志 , 2010,45\\(1\\):12-16.
［3］ Verani JR, McGee L, Schrag SJ, et al. Prevention of perinatalgroup B streptococcal disease-revised guidelines from CDC 2010.Morbidity and Mortality Report, 2010, 59\\(RR-10\\):1-36.
［4］ Van Dyke MK, Phares CR, Lynfield R, et al. Evaluation f universalantenatal screening for group B streptococcus. N Engl J Med , 2009,360\\(25\\):2626-2636.
［5］ Gilbert GL.Vaccines for other neonatal infections.are group Bstreptococcal infections vaccine-preventable. Expert Rev Vaccines,2004, 3\\(4\\):371-374.
［6］ 馬延敏 , 吳連方 , 黃醒華 , 等 . 孕婦Ｂ族溶血性鏈球菌帶菌與母嬰預后的關系 . 中華婦產科雜志 , 2000, 35\\(1\\):32-35.
［7］ 陳惠玲 , 鄧家德 , 葉惠芬 , 等 . 圍產期生殖道感染 B 族溶血性鏈球菌的耐藥性及耐藥基因檢測 . 中華婦產科雜志 , 2010,45\\(9\\):71-73.
